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熒光PCR之探針法

更新時間:2020-07-29      點擊次數:5456

熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高區別染色體上一個堿基的突變由于其鏈短分子量小雜交時間較短僅需1-2小時),可預測雜交條件可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低,也影響了檢測的敏感性僅能檢出含很少的標本。cDNA探針RNA為模板,用反轉錄酶合成單鏈cDNA探針主要用來分離cDNA文庫中相應的基因。RNA探針一般是單鏈,具有單鏈DNA探針的優點,又具有RNA:DNA雜交體比DNA:DNA雜交體有更高的穩定性,所以在雜交反應中RNA探針比相同活性的DNA探針所產生信號要強。熒光定量PCR類產品的組成方式通常為:1管反應緩沖液+1管酶的形式。其中反應緩沖液包含熒光PCR反應緩沖系統、引物、探針、dNTP;酶包含Taq酶、UNG酶。這種形式的產品使用方法復雜,必須先將反應緩沖液和酶按照比例混合均勻后,分裝至PCR擴增管中,然后再加入樣本。由于酶的用量通常較少(≤0.5μL)、酶液較粘稠,且配制過程繁瑣,配制誤差較大、反應重復性不好。熒光PCR凍干的試劑凍干機Pilot5-8T技術要點:

  1. 完整的PAT控制技術,可對凍干過程進行完整的控制和分析監控。包括預凍全過程控制、預凍結束判定、升華全過程控制、升華結束判定、解析全過程控制及凍干結束判定。
  2. 板層溫度均一度±1℃。
  3. 系統極限真空度±1Pa
  4. 系統真空泄露率<3Pa.L/S
  5. 外界干擾熱量屏蔽。
  6. 共晶點測試儀助力工藝開發。

      7.全進口配件

 

 

 

 

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