熒光PCR凍干及蛋白質(zhì)類(lèi)凍干保護(hù)劑

常用的凍干保護(hù)劑種類(lèi)有多輕基化合物、糖、蛋白質(zhì)、聚合物、氨基酸、鹽、胺、表面活性劑等。蛋白質(zhì)類(lèi)凍干保護(hù)劑可分為兩種 : 一種是蛋白質(zhì)藥物自身，另一種為外來(lái)蛋白質(zhì)。 一些蛋白質(zhì)經(jīng)凍融后的活性直接和蛋白質(zhì)的起始濃度有關(guān) , 起始濃度升高有時(shí)會(huì)促進(jìn)蛋白質(zhì)的復(fù)性一種常用的外來(lái)蛋白質(zhì)類(lèi)保護(hù)劑為血清白蛋白 , 它是一個(gè)經(jīng)典 、優(yōu)良的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑 。 例如 , 冷凍時(shí) , 1 % 牛血清白蛋白可使溶液的活性不受損失 ;人血清白蛋白則在更低濃度 ( 0 . 0 5 % 一 0. 1 % ) 時(shí)也能有效阻止蛋白質(zhì)表面的吸附，對(duì)凍干過(guò)程中多數(shù)蛋白都具有保護(hù)作用。當(dāng)干燥蛋白質(zhì)藥物時(shí)保護(hù)劑緊密地包裹相鄰近的蛋白質(zhì)分子形成一種在結(jié)構(gòu)上與冰相似 的碳水化合物玻璃體,由于私度很高其擴(kuò)散系數(shù)很低蛋白質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)能力減某一蛋白質(zhì)的保護(hù)作用通常有一個(gè)好的使用濃度( 或使用量 ) , 故選擇保護(hù)劑時(shí)還要合理選擇使用量。在做溶液凍干時(shí)，溶液濃度高或低對(duì)制干燥過(guò)程中藥液表面首先品的影響。溶液濃度過(guò)高時(shí)：被干燥形成結(jié)構(gòu)致密的表層。該表層孔隙細(xì)小，透氣性差，里面的水分難以穿過(guò)表層，因而沿瓶壁上升，導(dǎo)致制品離壁、萎縮；此外，濃度過(guò)高時(shí)，藥液在干燥過(guò)程凍干中容易結(jié)塊，所得制品外觀不均勻。濃度過(guò)低時(shí)：機(jī)械強(qiáng)度低，在包裝及運(yùn)輸過(guò)程后制品結(jié)構(gòu)比較疏松甚至變成粉末，影響制品的外觀。分享熒光PCR試劑凍干示例：(1)將熒光PCR擴(kuò)增緩沖液、引物、探針、熱啟動(dòng)Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護(hù)劑按照配方進(jìn)行混合；（2）凍干保護(hù)劑，可選用：甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐溫100、甲酰胺、氨基酸等。（3）將上述混合液灌裝至PCR擴(kuò)增管或者八聯(lián)管中。（4）進(jìn)行凍干。（5）出倉(cāng)進(jìn)行測(cè)試。（6）配方修正。